退火溫度（退火溫度是指分離引物和模板時(shí)的溫度參數(shù)。當(dāng)50％的引物和互補(bǔ)序列為雙鏈DNA分子時(shí)，退火溫度是影響PCR特異性的重要因素。 

理想地，退火溫度應(yīng)足夠低以確保同源引物的有效退火，而退火溫度應(yīng)足夠低以減少非特異性分離。合理的退火溫度范圍是55到70°C。退火溫度通常比底漆TM低5°C。 

我們能達(dá)到常溫嗎？大型法蘭通常采用固溶熱處理，通常稱為“退火”，溫度范圍為1040～1120 ℃ 。您還可以檢查退火爐，發(fā)現(xiàn)退火區(qū)中的大型法蘭配件應(yīng)為白熾燈，但不應(yīng)軟化和下垂。 

其次，爐體的密封性（爐殼用鋼板和型鋼焊接，小車用鋼板和型鋼焊接）。通過與爐襯的軟接觸密封裝置，小車可以減少熱輻射和對流損失，并有效地保證爐體的密封性。光亮退火爐應(yīng)關(guān)閉并與外界空氣隔離。只要打開排氣口（用于點(diǎn)燃排出的氫氣），氫氣就可以用作維護(hù)氣體。這種檢查方法可以用肥皂水清潔退火爐接頭之間的縫隙，以查看其是否會(huì)流失。最簡單的流出中心是退火爐入口和出口管的中心。 

其次，維持壓力，為避免輕微的泄漏，爐內(nèi)的維持氣體應(yīng)堅(jiān)持一定的正壓，如果是氫氣維持氣體，一般需要20kbar以上。退火氣氛：通常，純氫氣用作退火氣氛，氣氛的純度大于99.99％。如果大氣的另一部分是惰性氣體，則純度可能會(huì)降低，但其中不得包含過多的氧氣和水蒸氣。